實驗目的:本次實驗對象是小鼠肺組織,經(jīng)過單細胞制備儀制作后用流式細胞檢測活細胞得率。
樣品介紹:細胞樣品的制備在流式細胞檢測過程中十分重要,獲取活性高、完整性好的的單細胞懸液可以大幅度提高實驗的效率和成功率。
實驗設(shè)備:單細胞懸液制備儀 JX-CKSM-WK系列
小鼠肺組織的前處理實驗操作過程:
步驟一:手動將運行模塊(樣品槽)移至加熱模塊一側(cè),打開電源開關(guān),點擊熱板模塊加熱和運行模塊加熱,靜待5分鐘左右使模塊溫度上升至所需溫度,一般為37.5°C。
步驟二:將要研磨的小鼠肺組織樣品剪成 1mm 以下的小塊放入專用配套樣品試管中,加入消化液,消化液要盡量加滿,避免試管中有氣泡。
步驟三:將要研磨的小鼠肺組織樣品剪成 1mm 以下的小塊放入專用配套樣品試管中,加入消化液,消化液要盡量加滿,避免試管中有氣泡。
步驟四:將試管從預熱模塊中取出放入運行模塊中
步驟五:合上儀器蓋,選定程序,點擊啟動,運行半小時左右,程序停止后一會兒開蓋觀察試管中樣品的消化情況,若還有大塊組織存在,可以自定義程序選擇8000rpm,1min啟動。
步驟六:待消化液運行完后取出樣品,上下振蕩樣品管十下,觀察渾濁度和顏色,過細胞篩網(wǎng)后加入終止液即是單細胞懸液。
實驗操作注意事項:
1.消化酶和終止液均需要在冷凍環(huán)境下保存。
2.消化酶解凍時需要在常溫條件下解凍,不可以放入水浴或者其它加熱儀器中解凍,溫度升高對酶的活性會有很大的影響。
4.單次樣品量不要超過研磨管內(nèi)珠子的大小。
5.程序運行結(jié)束后不要立馬取出樣品,可以稍等一分鐘后再取出。
小鼠肺組織的前處理的實驗結(jié)果:上流式測細胞活率為96.8%,滿足實驗需求
小鼠肺組織樣品的前處理研磨實驗前后效果圖
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