單細胞懸液測序是能夠在單細胞層面進行高分辨率分析,避免了傳統(tǒng)基因組技術平均信號產(chǎn)生的結果誤差,是能夠揭示單個細胞的狀態(tài)和功能。
由于不同類型的組織細胞有著不同的細胞組成,也有著不同的細胞排列方式,而這也就進一步的導致了組織細胞在懸液制備時,有著不同的實驗條件。然而單細胞懸液的實驗結果也都是不定符合需求。
如若細胞直徑為6-8μm的細胞占比比例較高,且核率較低,則表明紅細胞含量可能較高,因此需要對其進行紅細胞裂解。如若紅細胞裂解仍然不干凈,則不建議繼續(xù)增加裂解系統(tǒng),可以適當?shù)难娱L裂紋時間或是增加裂紋次數(shù)。
細胞結塊率高的主要原因是組織沒有完全消化或是細胞釋放的DNA導致細胞的粘連;所以是有必要采取一定的措施將其進行優(yōu)化,如調整消化條件、DNA酶治療和輕微吹細胞團等措施進行操作。
如若發(fā)現(xiàn)細胞組織的活性較低,是需要通過去除死細胞的實驗來提高樣品活性。一般來說,死細胞去除在60%-75%的細胞活性范圍內是會具有較好的效果。
有時,在獲得細胞懸液后,如若這些參數(shù)不符合預期效果,則需根據(jù)具體情況去進行優(yōu)化,例如細胞活率、結團率、濃度、直徑分布等參數(shù),但在優(yōu)化操作中,切記其優(yōu)化方法操作是正確的,避免錯誤的優(yōu)化方法對細胞組織帶來的損耗。