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單細(xì)胞懸液制備儀對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的應(yīng)用
行業(yè)新聞 2023-02-10

  由于細(xì)胞類群是異質(zhì)的,即使是來(lái)源相同的單個(gè)細(xì)胞,也會(huì)由于一些原因彼此存在差異化,但細(xì)胞都是由遺傳物質(zhì)的載體,對(duì)于單個(gè)細(xì)胞間的基因組和轉(zhuǎn)錄組的差異化展現(xiàn),單細(xì)胞測(cè)序就是觀測(cè)單個(gè)細(xì)胞間基因組和轉(zhuǎn)錄組差異化的強(qiáng)大技術(shù)手段之一。

單細(xì)胞懸液制備儀

  單細(xì)胞懸液制備儀對(duì)生物細(xì)胞的測(cè)序中,可以選擇不同的讀長(zhǎng)、單端或雙端測(cè)序;由于對(duì)樣本檢測(cè)目的不同,數(shù)據(jù)分析、策略和方法也不同。

  

  單細(xì)胞測(cè)序通??梢苑譃镈NA測(cè)序和RNA測(cè)序兩大類。DNA測(cè)序主要是通過(guò)用高通量測(cè)序觀察基因組DNA水平的各種變化,包括從染色體到Kb片段等的復(fù)制數(shù)量的擴(kuò)大或缺失,以及點(diǎn)突變(SNP)、整合、重組等;RNA測(cè)序主要是通過(guò)觀察MRNA轉(zhuǎn)錄組水平的變化,包括各類基因表達(dá)產(chǎn)物的剪接狀況及其各種剪接體的相對(duì)比例和數(shù)量等。

  

  單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)應(yīng)用的流程大致包括;對(duì)單細(xì)胞的選取,可以在顯微鏡下手動(dòng)操作單細(xì)胞的選擇,也可使用自動(dòng)分選儀器來(lái)進(jìn)行選擇;同時(shí)細(xì)胞裂解和DNA擴(kuò)增,在細(xì)胞擴(kuò)增之前,RNA測(cè)序應(yīng)該有一個(gè)逆轉(zhuǎn)錄的過(guò)程;可以用各種方法來(lái)擴(kuò)大生物細(xì)胞的建庫(kù),擴(kuò)增產(chǎn)物的建庫(kù),建庫(kù)步驟也可與之前的DNA擴(kuò)展步驟相結(jié)合操作。

  

  兩種單細(xì)胞測(cè)序方法應(yīng)用的主要區(qū)別在于;RNA測(cè)序在細(xì)胞裂解后,DNA擴(kuò)增前增加了一個(gè)逆轉(zhuǎn)錄步驟,需先將mRNA轉(zhuǎn)化為cDNA,后續(xù)再進(jìn)行擴(kuò)增、建庫(kù)、測(cè)序等步驟。根據(jù)樣本不同的應(yīng)用目的,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析的步驟也不同。


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