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　　單細(xì)胞高通量液滴測(cè)序Drop-seq技術(shù)是一種可快速分析數(shù)千個(gè)單細(xì)胞的方法。通過(guò)此測(cè)序方法是能夠?qū)⒚總€(gè)細(xì)胞包裹在納升級(jí)的微滴中，進(jìn)行RNA雜交并產(chǎn)生MRNA轉(zhuǎn)錄，可進(jìn)一步分析MRNA轉(zhuǎn)錄的起源細(xì)胞。

　　單細(xì)胞高通量液滴測(cè)序過(guò)程

　　1、準(zhǔn)備材料　　

　　把細(xì)胞從樣品組織中分離出來(lái)，制備細(xì)胞懸浮液，制備微珠懸浮液帶分子條形碼。

　　2、微滴制備　　

　　把細(xì)胞懸浮液和微珠懸浮液泵入芯片，然后與油匯合形成單獨(dú)分散的微滴，用每個(gè)微珠將每個(gè)細(xì)胞包裹在同一個(gè)微滴中。

　　3、RNA雜交　

　　細(xì)胞組織在微滴中裂解，釋放mRNA，細(xì)胞在微珠上與分子條碼雜交。

　　4、逆轉(zhuǎn)錄　　

　　為了形成mRNA逆轉(zhuǎn)錄物(STAMPS)，裂解微滴，釋放mRNA雜交物，開(kāi)始逆轉(zhuǎn)錄。

　　5、PCR擴(kuò)增　　

　　在核酸外切酶的作用下，切斷每個(gè)MRNA逆轉(zhuǎn)錄物，并通過(guò)PCR擴(kuò)展核酸，以擴(kuò)大基因信息。

　　6、測(cè)序分析　　

　　采用各種生物信息學(xué)工具來(lái)對(duì)細(xì)胞生物進(jìn)行測(cè)序分析。

　　液滴微流控是可快速分離微體積中的樣本，可實(shí)現(xiàn)數(shù)千上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞的平行高通量分析，通常每秒可產(chǎn)生1000個(gè)微滴，每個(gè)微滴體積為1nl；此外，在液滴微流控實(shí)驗(yàn)過(guò)程中是不需要使用流熒光細(xì)胞儀等實(shí)驗(yàn)儀器，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、快速、便捷。

　　上述便是采用單細(xì)胞高通量液滴測(cè)序Drop-seq對(duì)樣本組織細(xì)胞的分離過(guò)程，將其細(xì)胞在微滴中升級(jí)，進(jìn)而進(jìn)行雜交轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而可分析出轉(zhuǎn)錄物的起源細(xì)胞樣本組織。